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人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2)ELISA試劑盒

時(shí)間:2022-02-15 15:11:54      
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檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

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試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12孔×8條

12孔×4條

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測(cè)抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個(gè)

1個(gè)

注:標(biāo)準(zhǔn)品(S0-S5)濃度依次為:0、2、4、8、16、32 ng/mL


操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

3.  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。 

4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。


結(jié)果判斷

 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。


試劑盒性能

1.  準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。

2.  靈敏度:最低檢測(cè)濃度小于0.1 ng/mL。

3.  檢測(cè)范圍:0.1-32 ng/mL

4.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

5.  重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

6.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

7.  有效期:6個(gè)月



上海舒話生物是一家集科研、生產(chǎn)、銷售為一體的生物,以科研試劑生產(chǎn)、診斷試劑原料供應(yīng)產(chǎn)品生產(chǎn)為核心,致力于為全球來自高等院校、政府研究機(jī)構(gòu)、診斷試劑生產(chǎn)廠家以及生物公司的廣大客戶們提供高質(zhì)量生物產(chǎn)品,產(chǎn)品擁有質(zhì)量保證,有問題免費(fèi)包換,還可以免費(fèi)代測(cè),想進(jìn)一步了解我們的產(chǎn)品歡迎您前來詳詢。



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